For several decades now the comet assay (single cell gel electrophoresis assay) has been the method used for the study of deoxyribonucleic acid damage, with multiple applications in genotoxicity assays, biomonitoring studies in humans, molecular epidemiology and ecotoxicology, and a fundamental tool for research into deoxyribonucleic acid damage and repair. The comet assay has stood out for its simplicity, sensitivity, versatility, rapidity and economy. It is a powerful technique based on microscopic visualization of deoxyribonucleic acid images after the cells have been embedded in agarose, lysed and subjected to alkaline electrophoresis. This basic methodology has been broadened, and may now detect with great sensitivity a large variety of deoxyribonucleic acid damage in any type of cell. Inclusion in the assay of enzymes capable of producing specific lesions on the deoxyribonucleic strand has broadened its detection range and sensitivity. However, it is important to bear in mind that its specificity is not absolute. The purpose of the present study is to point out some useful aspects and advantages of the method, and describe the experience with some technical aspects of the procedure, standardized in keeping with the conditions in the laboratory at the institute to extend its use in the country.

Desde hace varias décadas el ensayo Cometa, o electroforesis alcalina de células individuales, se ha convertido en un método establecido para el estudio del daño de ácido desoxirribonucleico, con múltiples aplicaciones en ensayos de genotoxicidad, estudios de biomonitoreo en humanos, epidemiologia molecular y ecotoxicología; así como una herramienta fundamental para investigaciones sobre daño y reparación del ácido desoxirribonucleico. Este ensayo se distinguió por su simplicidad, sensibilidad, versatilidad, rapidez y economía. Es una poderosa técnica que se basa en la visualización microscópica de las imágenes del ácido desoxirribonucleico después que las células son embebidas en agarosa, lisadas y sometidas a una electroforesis alcalina. Esta metodología básica ha sido ampliada, y permite ahora, detectar con alta sensibilidad una gran variedad de daños del ácido desoxirribonucleico en cualquier tipo de células. La inclusión en este ensayo, de enzimas capaces de producir lesiones específicas en la hebra de ácido desoxirribonucleico, ha incrementado su rango de detección y sensibilidad. Pero es importante tener claro que su especificidad no es absoluta. El propósito es destacar algunos aspectos útiles de este método y sus ventajas; describir la experiencia en algunos aspectos técnicos del proceder, normalizado según las condiciones del laboratorio en el instituto para ampliar su utilización en el país

Introduction:autistic spectrum disorders are considered to be a family of neurodevelopmental alterations characterized by difficulty to communicate and interact socially, as well as stereotyped, repetitive behavior. Though several hypotheses involve genetic and environmental factors in the etiopathogeny of this condition, their actual participation is still unknown. The present study explores the relationship between serum lead levels, DNA damage and the severity of autism. Methods: a study was conducted with 15 children 4-11 years old diagnosed with autistic spectrum disorders and a control group from the same age range. The intelligence quotient was measured by the Terman-Merrill test, and children were classified into two degrees of mental retardation (mild and moderate/severe). Blood lead levels were measured by mass spectrometry, whereas DNA damage was determined in peripheral blood lymphocytes using the alkaline electrophoresis assay (the comet assay). Results: this study did not show any significant difference in lead levels between the groups. DNA damage was greater in autistic patients than in the control group, and the difference was significant (p<0.05) when mental retardation severity was considered. Patients with a moderate/severe disorder showed significantly greater DNA damage than those with mild disorders and the control group. Conclusions: results confirm the presence of DNA damage in patients with autistic spectrum disorders, suggesting that this factor could be related to mental retardation severity.

Introducción: los trastornos del espectro autista se consideran una familia de alteraciones del neurodesarrollo, caracterizada por dificultades en la comunicación y la interacción social, así como la existencia de un comportamiento estereotipado y repetitivo. Aunque existen varias hipótesis que involucran a factores genéticos y ambientales en su etiopatogenia, la verdadera contribución de estos aún se desconoce. En este estudio se explora la relación entre los niveles séricos de plomo, el daño del ADN y la severidad del autismo. Métodos: se estudiaron 15 niños con el diagnóstico de trastornos del espectro autista entre 4 y 11 años de edad y un grupo control del mismo rango de edad. El coeficiente de inteligencia fue evaluado mediante la prueba de Terman-Merrill y los niños fueron clasificados en dos grados de retardo mental (ligero y moderado/severo). Los niveles de plomo en sangre fueron medidos por espectrometría de masa, mientras que el daño del ADN fue determinado en linfocitos de sangre periférica con el empleo de un ensayo de electroforesis alcalina (ensayo del cometa). Resultados: no se mostró diferencia significativa en los niveles de plomo entre los grupos. El daño del ADN fue mayor en los pacientes autistas en relación con el grupo control, cuya diferencia fue significativa (p< 0,05), cuando comparamos los grupos teniendo en cuenta la severidad del retardo mental. Los pacientes con trastorno moderado/severo mostraron un daño del ADN significativamente superior a los que presentaron trastornos ligeros y al grupo control. Conclusiones: los resultados confirman la presencia de daño del ADN en pacientes con trastornos del espectro autista, lo cual sugiere que este pudiera ser un factor que se relaciona con la severidad del retardo mental en estos enfermos.

External quality assessment allows us to determine the performance of individual laboratories to make trials or take specific measurements and identify the specific problems in them. The need to establish a cheap and reliable methodology for the external evaluation of the quality of some of some haematological variables of laboratories encouraged us to carry out this work. In this methodology, we define three stages: a) training, b) external control of a spectrophotometer technique, haemoglobin concentrations and microscopy, total leukocyte count that allowed us to assess the work of the haematology section, c) feedback of results and an in situ inspection to the ones that obtained deficient results to apply correction measures. The laboratory professionals were trained and informed on the procedures. The external evaluation was applied to the laboratories of four municipalities of Havana and the variables were standardized. Of the nine laboratories tested on haemoglobin concentration we had the following results: five of them obtained excellent marks, one was marked good and the other three were marked satisfactory. In relation to the total leukocyte count, two of them were marked excellent, three were marked good, one was considered satisfactory and the remaining three were not reported. The latter laboratories were visited and the problems were identified. The inter-laboratory rates of variation were calculated for group two with six laboratories. The result of haemoglobin was 2.05%, for a total leukocytes count of 9.93%. The implemented methodology requires fewer resources than the internationally recommended form and allows the differentiation of laboratories in terms of both accuracy and precision.

La evaluación externa de la calidad permite determinar el desempeño de laboratorios individuales para efectuar ensayos o mediciones específicos e identifica los problemas existentes en ellos. La necesidad de establecer una metodología económica y confiable para la evaluación externa de la calidad de algunas de las variables hematológicas de los laboratorios nos impulso a realizar este trabajo. En esta metodología definimos tres etapas: a) capacitación, b) control externo de una técnica por espectrofotometría, la concentración de hemoglobina y otra de microscopia, conteo total de leucocitos que permitieran evaluar el trabajo de la sección de hematología, c)la retroalimentación de los resultados y una inspección in situ a los que obtuvieran resultados deficientes para aplicar medidas correctivas. Los profesionales de los laboratorios recibieron la capacitación y los procedimientos. La evaluación externa se aplicó a los laboratorios de 4 municipios de La Habana y se estandarizaron las variables. De los 9 laboratorios examinados; en la concentración de hemoglobina: 5 obtuvieron calificación de excelente, 1 bien y 3 satisfactorio; en el conteo total de leucocitos: 2 con excelente, 3 bien, 1 satisfactorio y 3 no reportaron. Estos últimos fueron visitados e identificados los problemas. El coeficiente de variación ínter laboratorio se calculo para el grupo 2 con 6 laboratorios; en la Hb el resultado es de 2.05%, para el conteo total de leucocitos de 9.93%. La metodología implementada requiere de menos recursos que la forma recomendada internacionalmente y permite diferenciar los laboratorios en cuanto a la exactitud y la precisión.

The intercellular adhesion molecule is a transmembrane glycoprotein belonging to the immunoglobulin superfamily. Serum and cerebrospinal fluid (CSF) soluble intercellular adhesion molecule 1 (sICAM-1) from normal control children as well as from children with Guillain-Barré syndrome (GBS), with Coxsackie A9 virus meningoencephalitis and with Streptococcus pneumoniae meningoencephalitis were studied. sICAM-1 was quantified using an immunoenzimatic assay and albumin using the immunodiffusion technique in both biological fluids. Increased sICAM-1 values in CSF in patients with GBS correspond to an increase of the albumin CSF/serum quotient. In contrast, in inflammatory diseases like S. pneumoniae and Coxsackie A9 virus meningoencephalitis an increased brain-derived fraction was observed. In particular cases these values are 60-65% and 70-75% respectively. The results indicate an additional synthesis of sICAM-1 in subarachnoidal space during central nervous system (CNS) inflammatory process. An important role of sICAM-1 in the transmigration of different cell types into CSF during CNS inflammation in children with S. pneumoniae and Coxsackie A9 meningoencephalitis may be suggested.

La molécula de adhesión intercelular es una glicoproteína que pertenece a la superfamilia de las inmunoglobulinas. Se estudiaron los niveles de molécula de adhesión intercelular tipo 1 soluble (sICAM-1) en suero y líquido cefalorraquídeo (LCR) de niños con meningoencefalitis por Streptococcus pneumoniae y por Coxsackie A9 al igual que en niños con sindrome de Guillain-Barré (SGB). sICAM-1 fue cuantificado por ensayo inmunoenzimático y la albúmina por inmunodifusión en ambos líquidos biológicos. Los valores incrementados de sICAM-1 en LCR en los pacientes con GBS corresponden a valores aumentados de razón LCR/suero de albúmina. En contraste, en las enfermedades inflamatorias como las meningoencefalitis por S. pneumoniae y por Coxsackie A9 se observa un incremento en la fracción derivada del cerebro. En casos particulares los valores se incrementan hasta un 60-65% y 70-75% respectivamente. Los resultados indican una síntesis adicional de sICAM-1 en el espacio subaracnoideo durante el proceso inflamatorio del sistema nervioso central (SNC). Esto puede sugerir un importante papel del sICAM-1 en la transmigración de diferentes tipos celulares en el LCR durante la inflamación del SNC en niños con meningoencefalitis por S pneumoniae y coxsackie A9.

OBJECTIVE: to attain the link between teaching and research in the Immunology subject for students of Health Technology. METHODS: practical activities of Immunology were established in the Cerebrospinal Fluid Central Lab for all the 4th-year students of the career of this specialty and modality. The practical activity included the use of various techniques. The interested were advised to make a research paper on neuroimmunology topics based on the patients suffering specific diseases at the same hospitals of the students as a final test of the subject. RESULTS: the support to this strategy was unanimous with highly satisfactory results. The evaluation consisted in the oral and writing presentation of the final papers. Of the 10 papers presented, 6 have the highest qualification, and 4 were recommended to be presented in the Student's Scientific Meeting of faculty. CONCLUSIONS: the results confirmed the convenience of linking theory with practice and with the research activities in the teaching of this specialty and modality.

OBJETIVO: lograr la vinculación de la docencia y la investigación en la asignatura Inmunología para los estudiantes de Tecnología de la Salud. MÉTODOS: se establecieron actividades prácticas de Inmunología en el Laboratorio Central de Líquido Cefalorraquídeo para todos los alumnos de cuarto año de la carrera de esta especialidad y modalidad. La actividad práctica incluyó la realización de diversas técnicas. Además, se orientó a los interesados en hacer un trabajo de investigación con temas de neuroinmunología a partir de pacientes con determinadas enfermedades en los hospitales de procedencia de los estudiantes como examen final de la asignatura. RESULTADOS: el respaldo a esta forma fue unánime con resultados altamente satisfactorios. La evaluación fue la presentación oral y por escrito de los trabajos finales. De los 10 trabajos presentados, 6 obtuvieron la máxima calificación y 4 fueron recomendados para ser presentados en la Jornada Científica Estudiantil de la facultad. CONCLUSIONES: los resultados confirman lo beneficioso que resulta vincular la teoría con la práctica y las actividades de investigación en la docencia de esta especialidad y modalidad.

INTRODUCTION: Multiple sclerosis (MS) is a chronic, inflammatory and progressive disease of the central nervous system in which local inflammatory injuries of the brain white matter appears, being the most outstanding feature the myeline loss (demyelination). OBJECTIVE: To determine if the complement system might be involved in the MS immunopathogeny favouring the mechanism intervening in the myelin destruction. METHOD: Samples of sera and CSF from twelve patients with a diagnosis of MS obtained at the moment of the admission to the hospital at the beginning of the break out, were collected. Levels of C3c and albumin in sera and in CSF were quantified using radial immunodiffusion plates. RESULTS: High values over 80% of intrathecal synthesis were obtained except in one of the patients. CONCLUSION: Intrathecal synthesis of C3c and its liberation to the CSF means that the activation of the complement system in any of the two ways has taken place, and that once performed its biological functions, has suffered a degradation process.

INTRODUCCIÓN: La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad crónica, inflamatoria y progresiva del sistema nervioso central que cursa con la aparición de lesiones inflamatorias focales en la sustancia blanca cerebral, en las que lo más llamativo es la pérdida de mielina (desmielinización). OBJETIVO: Conocer si el sistema de complemento puede estar involucrado en la inmunopatogenia de la EM favoreciendo los mecanismos que median la destrucción de la mielina. MÉTODO: Se colectaron muestras de suero y LCR de doce pacientes con diagnóstico de EM obtenidas en el momento del ingreso al inicio del brote. Se cuantificaron los niveles de C3c y albúmina en suero y en LCR en placas de inmunodifusión radial. RESULTADOS: Se obtuvieron altos valores que superan el 80% de síntesis intratecal, menos en uno de los pacientes. CONCLUSION: La síntesis intratecal de C3c y su liberación al LCR significa que ha sucedido la activación del sistema de complemento en alguna de las dos vías y que una vez cumplidas sus funciones biológicas, ha sufrido un proceso de degradación y liberación al LCR en forma de C3c.

INTRODUCTION: Reiber's quotient diagram or reibergram has a growing apply for characterize the intratecal synthesis of proteins. Firstly reibergrama was used for the major classes of immunoglobulins but later it was used to evaluate other proteins based on the theory about molecular flux/cerebrospinal fluid (CSF) flow rate. METHOD: C3c is a degradation product of complement factor C3 with 145 KDa and approaches to IgG molecular characteristics according with Fick's diffussion laws. It was assumed IgG constants and graphic for IgG constants and graphic to evaluate the intrathecal synthesis of C3c. Twenty-seven patients and 27 controls were studied. Serum and CSF C3c and albumin were quantified by immunodiffusion. RESULTS: The patients with the C3c proposed reibergram were evaluated. It has been proved its validity under several CSF blood barrier conditions. CONCLUSION: Reibergram for C3c can be used for the evaluation of the intrathecal synthesis of this protein.

INTRODUCCIÓN: El diagrama de las razones de Reiber o reibergrama cobra cada día mayores usos para la caracterización de la síntesis intratecal de proteínas. El reibergrama fue definido para las clases mayores de inmunoglobulinas pero luego ha sido utilizado para evaluar otras proteínas basado en la teoría de la difusión molecular/velocidad de flujo del líquido cefalorraquídeo (LCR). MÉTODO: El C3c, producto de la degradación del factor del complemento C3 y con una masa molecular de 145 KDa, se acerca a las características moleculares de la IgG para las leyes de la difusión de Fick. Se asume las constantes de la IgG en la fórmula de Reiber para evaluar la síntesis intratecal de C3c así como su correspondiente reibergrama. Se estudiaron 27 pacientes y 27 controles a los que se les dosificó albúmina y C3c en suero y LCR por inmunodifusión radial. RESULTADOS: Con el reibergrama propuesto para el C3c se evaluaron estos pacientes. Se comprueba la validez de este reibergrama para distintas condiciones de barrera con o sin síntesis intratecal de C3c. CONCLUSION: El reibergrama y su fórmula correspondiente propuesto para la C3c puede ser usado para la evaluación de la síntesis intratecal de C3c.